STEC qPCR Screening Kit

nr kat. E0480

Opis

  • STEC qPCR Screening Kit to gotowy do użycia zestaw do wykrywania DNA werotoksycznych szczepów Escherichia coli (STEC) w żywności i z próbek środowiskowych po wzbogacaniu.
  • Zestaw zawiera wszystkie odczynniki i startery potrzebne do amplifikacji fragmentów genomowego DNA E. coli. Szczepy STEC są identyfikowane na podstawie obecności specyficznej sekwencji genu odpowiedzialnego za wytwarzanie toksyny Shiga (stx1 lub stx2, w tym podtyp stx2f). Intymina (gen eae) jest dodatkowym markerem wirulencji. Detekcja danej sekwencji odbywa się przy użyciu specyficznych sond znakowanych barwnikami fluorescencyjnymi. Geny stx1/stx2 są wykrywane jednocześnie w kanale FAM, natomiast gen eae w kanale Cy5.
  • Dodatkowo zestaw posiada wewnętrzny system kontroli amplifikacji pozwalający na zidentyfikowanie potencjalnych inhibitorów reakcji. Kontrola wewnętrzna składa się ze starterów, sondy znakowanej barwnikiem HEX i egzogennego fragmentu DNA zawartego w STEC Master Mix. Amplifikacja kontroli wewnętrznej nie ma wpływu na wykrywanie szczepów STEC, ale jest wskaźnikiem poprawności reakcji PCR.
  • STEC Master Mix zawiera onTaq Polimerazę DNA, zoptymalizowany bufor reakcyjny, ROX i deoksynukleotydy (dNTPs).
  • onTaq Polimeraza DNA to enzym najnowszej generacji typu “hot start”, który jest blokowany w niskich temperaturach, co umożliwia przygotowanie reakcji w temperaturze pokojowej.
  • Aktywność polimerazy przywracana jest podczas 15-minutowego początkowego etapu denaturacji.
  • Barwnik referencyjny ROX zawarty w STEC Master Mix umożliwia normalizację fluorescencji w niektórych urządzeniach real-time PCR. Użycie barwnika referencyjnego ROX jest konieczne we wszystkich termocyklerach firmy Applied Biosystems i opcjonalne w przypadku termocyklerów firmy Agilent. ROX kompensuje zmiany sygnału fluorescencyjnego między dołkami z powodu niewielkich różnic w objętości reakcji i fluktuacji fluorescencji. Obecność barwnika ROX nie koliduje z PCR w czasie rzeczywistym na urządzeniach niewymagających tego barwnika referencyjnego.
  • DNA do reakcji real-time PCR powinno być dobrej jakości i oczyszczone przy pomocy dedykowanych, komercyjnie dostępnych zestawów wykorzystujących technologię złóż krzemionkowych lub kulek magnetycznych.